单细胞测序核心技术

BD Rhapsody: 单细胞分析工作流程

1. BD Rhapsody 核心技术之微孔板

一个微孔 =   一个单细胞 + 一个磁珠

BD Rhapsody Express单细胞分析系统提供的单细胞分割，以微孔为基础，功能强大。
●   限度一套台式设备，没有射流泵
●   当细胞在重力作用下沉入微孔时，可以对其进行温和的处理
●   每个BD Rhapsody微孔板均包括一个超过22万个分区的微孔阵列
●   BD Rhapsody"微孔板体积约为600μL，稀释细胞悬浮液可直接装入微孔板，无需将其浓缩到非常小的体积
●   由于没有微流通道，因此不需要担心通道堵塞的问题
●   微孔经过特殊处理，以防止细胞粘附在表面，并进行深入的质量控制

Rhapsody利用微孔进行单细胞分离，属于Microwell-seq。 20万个微孔的尺寸被设计成一个微孔恰好可以容纳一个bead+一个细胞。

2. BD Rhapsody核心技术之Barcoded Bead

3. 单细胞文库制备及测序

Single cell isolation and capture流程图

4. BD Rhapsody技术优势

成本更低—— 靶向基因检测，避免看家基因占用的大量测序数据，大大节省了测序和分析成本。

超高细胞捕获效率—— 有效细胞捕获率60%，远高于市场上目前所有大通量单细胞转录组测序技术。

罕见转录本，更高检出率—— 靶向定制panel，选定特定基因组合，提高UMI计数效率，罕见转录本检测阈值更低。

克服PCR，扩增偏差——引入单细胞测序金标准，BD分子标签，降低非特异性表达。

实理更高的分辨率——可以分辨更精细、微观的细胞群和细胞亚种群。

反转录的磁珠，超常稳存储——完整cDNA可在磁珠微球结构保存长3月(4度)，随用随取。

灵活分样组合——提高样品通量（最多可12个样本同时建库，可等分，可随机组合）；又可以同时进行单细胞蛋白和转录组联合检测，大大降低成本的同时，也为单细胞多组学研究提供了更高效的平台。

5. BD Rhapsody产品线overview