流式细胞分析仪通过鞘液包裹技术让细胞在液流中排成单列,依次通过激光检测区;细胞受激光照射后产生前向散射光(反映细胞大小)、侧向散射光(反映细胞内部复杂度),若细胞标记了荧光染料,还会激发出特定波长的荧光信号。这些光信号被光电探测器转化为电信号,经计算机数字化处理后,就能精准获取细胞的形态、表面分子表达等多维信息。
基础操作流程:
开机后完成每日管路清洗,新建实验项目并设置对应检测通道,将显示采集细胞数调整为10000个。
上空白管调节电压,将阴性细胞的荧光强度控制在10³-10⁴区间内,完成圈门参数的初步设定。
依次上样对照组和待测样本,振荡混匀后启动采集,待目标门内收集满设定数量的细胞后停止记录。
实验结束后用清洗液冲洗管路5分钟,再用去离子水冲洗5分钟,完成关机操作。
故障排查:
液流压力异常报错:先检查鞘液管是否弯折,重启仪器执行管路吹扫程序,排除管路内气泡堵塞问题。
喷嘴堵塞喷出气泡:用10%次氯酸钠反复冲洗,无效时用注射器在喷嘴处抽吸疏通,严重时可将喷嘴浸入10%次氯酸钠中超声1小时,再用过滤水超声1小时清洁。
信号噪声过高:清洁光学系统,检查流体路由是否有残留污染,排查激光器性能,必要时更换老化激光器。
荧光信号弱/无信号:先排查样本染色和抗体操作,再检查激光器、滤光片和检测器是否正常,确认补偿参数设置合理。